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干貨分享:如何提高ELISA的重現(xiàn)性?

更新時(shí)間:2023-11-27    點(diǎn)擊次數(shù):2170

  如何提高ELISA的重現(xiàn)性?


  免疫檢測法的性表現(xiàn)為單次實(shí)驗(yàn)孔間(批內(nèi))的重復(fù)性和多次實(shí)驗(yàn)之間(批間)的重復(fù)性。CV值高則表明度低,通常由以下兩個(gè)原因造成:移液技術(shù)和洗滌技術(shù)。

  移液技術(shù)

  1. 移液時(shí),槍頭應(yīng)對(duì)準(zhǔn)孔中央,避免接觸孔壁及底部。

  2. 移液后輕輕晃動(dòng)混勻試劑。

  3. 如果您的樣品具有黏性,請(qǐng)預(yù)先潤洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時(shí)等待片刻使體積平衡后再取出。

  4. 移液不充分或移液體積不均,說明移液器需要校正。必要時(shí)請(qǐng)檢查移液器并重新校正。

  5. 加樣時(shí),不同的試劑標(biāo)準(zhǔn)品和樣本間都要確保更換槍頭,避免交叉污染。

  6. 確保使用合適的槍頭。不合適的槍頭無法正確量取吸液和加樣的體積。

  洗滌技術(shù)

  1. 如果使用自動(dòng)洗板機(jī)或多通道移液器,請(qǐng)確保進(jìn)出口能正常運(yùn)作。

  2. zui后一次洗滌后,翻轉(zhuǎn)酶標(biāo)板倒出多余的洗滌液,并在吸水紙上拍干液體。洗板太快或太慢都會(huì)降低度。不能讓孔內(nèi)液體自然風(fēng)干,需立即進(jìn)行下一步操作。

  3. 按照說明書,添加足量的洗滌液至孔內(nèi),并保證洗滌。

  4. 由于洗滌液不是通用的,當(dāng)試劑盒內(nèi)的洗滌液用完時(shí),請(qǐng)不要使用其他試劑盒中的洗滌液。如有需要,可聯(lián)系技術(shù)支持尋求幫助。

  5. 不要減少洗滌時(shí)的浸泡時(shí)間或跳過浸泡的步驟。

  6. 按照說明書上推薦的洗滌次數(shù)清洗,隨意改變洗滌次數(shù)會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

  貯液瓶

  為避免污染,不同的試劑使用不同的貯液瓶。一些試劑或樣本很容易被污染(比如唾液、氧化劑等),請(qǐng)參考說明書操作。必要時(shí)候采取一些預(yù)防措施保護(hù)溶液。

  封板覆膜

  使用過的封板覆膜可能含有上一步實(shí)驗(yàn)殘留的試劑,如果重復(fù)使用會(huì)造成孔板污染。建議每一次孵育使用新的封板覆膜。

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